AVALIAÇÃO DO EFEITO ANTIFÚNGICO DA PERESKIA ACULEATA MILLER EM CEPAS DE CANDIDA sp. ISOLADAS DE PACIENTES HIV POSITIVO.
Candida spp. Biofármacos. Ensaio antifúngico. Plantas medicinais.
O objetivo do presente estudo foi avaliar se o extrato hidroalcóolico das folhas de Pereskia aculeata Miller promove efeito antifúngico em cepas de Candida spp isoladas de pacientes HIV positivo. Para tanto, as folhas de Pereskia aculeata Miller serão coletadas no sítio Vale da Biodiversidade, localizado na cidade de Mulungu, Estado do Ceará. Os extratos das folhas de Pereskia aculeata Miller serão preparados com álcool 70% e água destilada em diferentes diluições 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 e 1:32 de acordo com a melhor abordagem utilizada e discutida pelos autores por meio da técnica de diluição seriada. Os poços controle positivo irá conter 100 μL de meio estéril, isento dos extratos e 100 μL das suspensões, 2X concentradas dos inóculos. Os poços controle negativo terão 200 μL de meio estéril, adicionado de solução salina como controle. A seguir, cada poço da placa de microdiluição receberá um valor numérico, usando a seguinte escala: 0 - opticamente claro; 1 - crescimento indefinido; 2 - redução proeminente de crescimento; 3 - ligeira redução do crescimento; 4- nenhuma redução do crescimento. Em seguida será realizado o teste da Concentração inibitória mínima determinada também pelo ensaio de microdiluição em caldo de acordo com Clinical and Laboratory Standards Institute padrão, será definida como a menor concentração do extrato de P. aculeata capaz de inibir em 50% o crescimento fúngico em relação aos poços do controle livre da substancia. Além disso optou-se por realizar também o método de difusão em meio sólido para comparação dos métodos. Em complemento, será avaliada também a formação de biofilme, assim como a atividade do extrato a esse mecanismo de resistência, de modo que a análise ocorra de forma similar, ou seja, pela concentração inibitória mínima do biofilme que será determinada como a concentração mínima capaz de reduzir em 50% e 90% a atividade metabólica do biofilme quando comparado a atividade metabólica do controle de crescimento do biofilme da respectiva cepa sem a adição de antifúngicos. Os dados serão tabulados em Planilha Microsoft Office Excel 2013® para análise e geração de gráficos e plotados para o Programas estatístico Statistical Package for the Social Sciences – SPSS versão 20.0, para a análise descritiva e estatística inferencial. Os valores obtidos serão expressos ± erro padrão médio (E.P.M), e para comparação entre as médias será utilizada a análise de variância (ANOVA), com índice de significância de 0,05.